Адефовир

Адефовир

De novo entecavir+adefovir dipivoxil+lamivudine triple-resistance mutations resulting from sequential therapy with adefovir dipivoxil, and lamivudine
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4832522/

Энтекавир-резистентные мутации обычно индуцируются лечением энтекавиром у пациентов с хроническим гепатитом В. Тем не менее, антацивир + адефовир дипивоксил + ламивудин тройные резистентные мутации, вызванные последовательным или комбинированным лечением ламивудином и адефовиром дипивоксилом, никогда не сообщались.

Мы ретроспективно рассмотрели 1200 пациентов, которые были протестированы на устойчивость к анти-HBV-лекарственным средствам в больнице Beijing Ditan в Столичном медицинском университете, и было зарегистрировано пять пациентов с множественной лекарственной устойчивостью к ламивудину и адефовиру дипивоксилу. Для генетического анализа использовались образцы сыворотки крови, которые дали в общей сложности 135 клонов. Энтекавир + адефовир дипивоксил + ламивудин тройные резистентные мутации были выявлены у 60% (3/5) энтекавир-наивных пациентов, которые получали последовательную терапию адефовиром дипивоксилом и ламивудином. В частности, мы обнаружили один клон rtM204I + rtL180 M + rtM250 V + rtA181 V среди 23 клонов у пациента 1 (4,35%), один клон rtM204 V + vrtL180 M + rtM250 V + rtA181 V среди 24 клонов у пациента 2 (4,17%), , и 2 клона, укрывающих rtM204 V + rtL180 M + rtM250 V + rtA181 V и rtM204 V + rtL180 M + rtI169 V + rtA181 V среди 20 клонов у пациента 3 (10,0%). Другие 2 пациента показали множественную лекарственную резистентность после комбинации ламивудина / телбивудина и адефовира дипивоксила, но у этих двух пациентов не было обнаружено мутаций резистентности к энтекавиру.

Тринорезистентные мутации De novo entecavir + adefovir dipivoxil + lamivudine могут быть вызваны последовательной терапией адефовиром дипивоксилом и ламивудином у пациентов, которые никогда не принимают энтекавир. Эти результаты предоставляют важную информацию для последовательной терапии адефовиром дипивоксилом и ламивудином и использование энтекавира в качестве спасательной терапии для этих пациентов с множественной лекарственной устойчивостью.

В онлайн-версии этой статьи (doi: 10.1186 / s12941-016-0138-0) содержится дополнительный материал, доступный для авторизованных пользователей.

По оценкам, хроническая инфекция вируса гепатита B (HBV) затрагивает примерно 120 миллионов человек в Китае, при этом ежегодная смертность около 300 000 человек, в основном в результате цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы (HCC), связанных с HBV [1]. Хотя антивирусную терапию с нуклеозидными / нуклеотидными аналогами (NA) и интерферонами (IFN) можно использовать для подавления репликации HBV и предотвращения прогрессирования заболевания, следует регулярно контролировать побочные эффекты противовирусных препаратов [2, 3]. Пять НС в настоящее время одобрены для лечения анти-HBV в Китае, включая ламивудин (LAM), адефовир дипивоксил (ADV), телбивудин (LdT), энтекавир (ETV) и тенофовир дизопроксил фумарат (TDF). Одной из основных проблем терапии NA является возникновение резистентности к ВГВ после длительного лечения, особенно для лекарств с барьерами с низкой сопротивляемостью (LAM, ADV и LdT) [2, 3]. У некоторых пациентов мутации, вызывающие множественную лекарственную устойчивость (МЛУ), могут возникать после последовательной монотерапии с низким сопротивлением NAs [3]. Yim et al. сообщили о трех случаях ЛАМ + ADV-резистентных пациентов после последовательной терапии LAM и ADV [4]. Liu et al. обнаружил тройной резистентный штамм HBV ETV + ADV + LAM у пациента с устойчивостью к ЛАМ + ADV, который принял последовательное ЭТВ в качестве спасательной терапии [5]. Кроме того, Kim et al. сообщили о шести случаях сопротивления ETV + ADV + LAM, которое произошло после последовательной терапии LAM, ADV и ETV [6].

Мутации резистентности к ETV обычно индуцируются обработкой ETV. Однако Yang et al. что LAM-резистентный HBV также уменьшает восприимчивость к ETV (снижение в 37-47 раз) [7]. Кроме того, Inoue et al. описал пациента, который получил ЛАМ + ADV, а затем разработал резистентность к эволе n novo с мутациями rtM204 V + rtL180 M + rtT184 S [8]. Однако до сих пор неясно, приводит ли последовательная или комбинированная терапия с LAM и ADV, индуцирует тройные резистентные мутации ETV + ADV + LAM. Кроме того, ETV + ADV по-прежнему используется для спасательной терапии у многих пациентов с ЛАМ + ADV-резистентностью [9-11], особенно в Китае, где TDF является дорогостоящим и не покрывается системой возмещения. Поэтому мы ретроспективно проанализировали пациентов с хроническим гепатитом B (CHB) в больнице Beijing Ditan из Столичного медицинского университета, у которых последовательная или комбинированная терапия с LAM + ADV не была успешной. Генетический анализ сохраненных образцов сыворотки выявил тройные резистентные мутации ETV + ADV + LAM у трех пациентов с наивысшей эффективностью ETV, которые получали последовательную терапию ADV + LAM.

Первоначальная популяция исследования состояла из 1200 пациентов с ХГБ, прошедших тестирование на резистентность к лекарственным средствам с помощью прямого секвенирования вложенной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в больнице Beijing Ditan. Письменное согласие было получено от каждого пациента. Демографические и клинические данные были собраны с использованием вопросника. Образцы сыворотки хранили при -20 ° C до дальнейшего анализа. Для исследования были отобраны пациенты, проявляющие MDR как для LAM, так и для ADV. Клинические данные были подтверждены путем проверки медицинских записей в информационной системе больницы. Это исследование было одобрено комитетом по этике больницы Beijing Ditan.

Выделение ДНК HBV проводили с использованием набора аминокислот AxyPrep для вирусной ДНК / РНК Miniprep Kit (Corning Inc., Corning, NY). Вложенное PCR-прямое секвенирование выполнялось, как описано ранее [12]. Продукты ПЦР очищали с использованием набора для очистки ПЦР QIAquick (Qiagen, Valencia, CA, США) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенную ДНК секвенировали с использованием автоматизированного ДНК-секвенатора ABI 3730 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) в Beijing Augct Bioengineering Co., Ltd. Последовательности ДНК были выровнены с использованием программного обеспечения SeqMan и EditSeq (DNASTAR Inc., Madison, WI). Результаты секвенирования полимеразы HBV также использовались для генотипирования HBV с помощью инструмента для генотипирования веб-сайта Национального центра информации о биотехнологиях [13]. ПЦР-амплифицированную ДНК HBV клонировали в простой вектор pGEM-T (Promega, Madison, WI) в соответствии с инструкциями производителя. Клоны (n = 20-38) выбирали у каждого пациента, и последовательности анализировали с использованием программного обеспечения MegAlign (DNASTAR Inc.).

Было зарегистрировано пять пациентов с HBV с MDR как для LAM / LdT, так и для ADV. Демографические и клинические характеристики пациентов вместе с результатами прямого секвенирования вложенных продуктов ПЦР показаны в таблице 1. Генотипирование HBV показало, что все 5 пациентов были инфицированы генотипом C HBV.Таблица 1Демографические и клинические характеристики пациентов

ADV adefovir dipivoxil, LAM lamivudine, LdT telbivudine, PCR-полимеразная цепная реакция, хронический гепатит B CHB, гепатоцеллюлярная карцинома HCC, комбинированная терапия LAM + ADV LAM и ADV

обозначение ↓, за которым следует

Всего из пяти пациентов было получено 135 клонов. Все клоны были отправлены в NCBI GenBank, а номера доступа показаны в дополнительном файле 1: Таблица S1. Результаты клонального анализа показаны на рисунке 1. Пациент 1 получал последовательную терапию ADV и LAM, а прямое секвенирование вложенного продукта ПЦР показывало мутации rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V при вторичном вирусологическом прорыве, тогда как rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V-штаммы составляли 78,26% (18/23) клонов в клональном анализе. Кроме того, 17,39% (4/23) и 13,04% (3/23) клонов укрывали мутации rtM204 I и rtA181 T, соответственно, которые не были обнаружены путем прямого секвенирования. Более того, один клон (4,35%) содержал мутации rtM204 I + rtL180 M + rtM250 V + rtA181 V, что приводило к резистентности к LAM + ADV + ETV (дополнительный файл 2: рисунок S1); однако этот пациент никогда не получал терапию ETV. 1Генетический анализ штаммов с множественной лекарственной устойчивостью (135 клонов) у пациентов, получающих аналог нуклеозид / нуклеотид. В расширенных разделах показаны мутации резистентности de novo entecavir

Пациент 2 получал последовательную терапию ADV и LAM, а секвенирование выявляло мутации rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V при вторичном вирусологическом прорыве, тогда как штаммы rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V составляли 95,83% (23/24) клонов в клоне анализ. Кроме того, один клон (4,17%) имел мутации rtM204 V + rtL180 M + rtM250 V + rtA181 V, что привело к резистентности к LAM + ADV + ETV (дополнительный файл 3: рисунок S2). Этот пациент также никогда не получал терапию ETV.

Пациент 3 получал последовательную терапию ADV и LAM, и секвенирование показало мутации rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V при вторичном вирусологическом прорыве, тогда как 85,0% (17/20) клонов содержали мутации rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V. Кроме того, один клон (5,0%) имел мутации rtM204 V + rtA181 T. Более того, два клона (10,0%) имели мутации с тройным сопротивлением ETV + LAM + ADV (дополнительный файл 4: рисунок S3 и дополнительный файл 5: рисунок S4), хотя этот пациент также никогда не получал терапию ETV.

Пациент 4 получил ADV + LAM для спасательной терапии при резистентности к ADV, и в последовательности были обнаружены мутации rtM204 I + rtA181 V + rtA181 T при вторичном вирусологическом прорыве. Высокое разнообразие мутированных штаммов наблюдалось в клональном анализе с семью мутационными узорами, присутствующими в 30 клонов. Мутация rtN236 T не была обнаружена путем прямого секвенирования продуктов ПЦР, и у этого пациента не было обнаружено мутаций, резистентных к ETV.

Пациент 5 получил ADV + LAM для спасательной терапии при резистентности к ЛАМ, но позже был переведен на монотерапию LdT, которая была запрошена пациентом из-за проблем с повышением креатинина. Последовательность идентифицировала мутации rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V при вторичном вирусологическом прорыве. Все клоны укрывали мутации rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V, в соответствии с результатами секвенирования, и не было обнаружено мутаций сопротивления de novo ETV.

Были проанализированы возможные перекрывающиеся мутации S-гена всех клонов, несущих мутацию rtA181 T (дополнительный файл 6: таблица S2). У пациента 1 3 клона, несущие мутацию rtA181 T, имели мутации sW172 * (стоп-кодон) в перекрывающемся S-генах. Кроме того, 1 клон и 15 клонов, несущих мутации rtA181 T у пациентов 3 и 4 соответственно, показали мутации sW172 *.

В этом исследовании мы провели генетический анализ с образцами сыворотки, полученными от пяти пациентов с хронической инфекцией HBV, которые проявляли MDR до LAM / LdT и ADV после последовательной / комбинированной терапии с LAM / LdT и ADV. Удивительно, но мутации сопротивления de novo ETV присутствовали у всех трех пациентов, которые получали последовательную терапию ADV + LAM. Inoue et al. ранее выполнял клональный анализ и сообщал, что штаммы с сопротивлением ETV укрывают только мутации резистентности к ETV и не мутации ADV резистентности. Однако в настоящем исследовании у всех трех пациентов были штаммы HBV с MDR для ETV + LAM + ADV, хотя эти клоны MDR составляли лишь незначительную популяцию квазивидов.

Существует несколько сообщений об использовании ETV в качестве спасательной терапии для пациентов с MDR до LAM + ADV. Однако Heo et al. сообщил, что монотерапия ETV хуже, чем спасательная терапия у пациентов с MDR до LAM и ADV [14]. Кроме того, Xu et al. сообщило об использовании ETV + ADV для спасательной терапии у 45 пациентов, которые не смогли ответить на лечение несколькими НС, причем 2/45 пациентов продемонстрировали сопротивление LAM + ADV на исходном уровне. Однако после 24 месяцев лечения с помощью ETV + ADV один пациент до сих пор не достиг полного вирусологического ответа (ДНК HBV ≤500 копий / мл) (11). Кроме того, Lim et al. сообщили, что ETV + ADV можно использовать в качестве спасательной терапии у пациентов с субоптимальным ответом на LAM + ADV; Тем не менее, только 28,9% (13/45) пациентов достигли вирусологических ответов (ДНК HBV

Настоящее исследование также указывает на необходимость более чувствительных тестов на устойчивость к ВГВ в клинической практике. Прямое упорядочение продуктов ПЦР часто используется в клинической практике и испытаниях для выявления устойчивости к НД [16, 17]; однако он может идентифицировать мутации только тогда, когда они достигают примерно 20% от общего пула квазивидов HBV [18]. Как показано в этом исследовании, прямое секвенирование ПЦР-продуктов неспособно обнаруживать штаммы de novo ETV-резистентности у пациентов 1, 2 и 3, так как эти штаммы составляли 4,35, 4,17 и 15,0% от общего количества квазиспецификов соответственно. Однако незначительные мутантные штаммы могут развиваться до основных штаммов под давлением отбора ETV, и поэтому их раннее обнаружение важно. Сообщалось о более чувствительных тестах на устойчивость к обнаружению мутантных штаммов, содержащих

В исследовании также обращается внимание на использование менее мощных НС в комбинации в качестве спасательной терапии для устойчивости к НС [2, 3]. Добавление LAM является терапевтическим вариантом для пациентов с АДВ-резистентностью. В этом исследовании пациент 4 развил MDR до LAM + ADV, получая комбинированную терапию LAM + ADV для спасения устойчивости ADV. В других докладах описаны подобные явления [8, 15]. Таким образом, тщательное и быстрое ингибирование репликации HBV имеет решающее значение для комбинированной терапии; в противном случае комбинированная терапия LAM + ADV может увеличить давление выбора обоих препаратов у пациентов с персистирующей виремией.

В этом исследовании все пациенты с МЛУ были инфицированы генотипом С. Мы рассматриваем это частично потому, что генотип С преобладает в северной части Китая [1]. В нескольких сообщениях указано большее количество мутаций резистентности ADV или LAM в генотипе C HBV по сравнению с генотипом B [21, 22]. Однако размер выборки был слишком мал, чтобы установить корреляцию между мутациями генотипа C и MDR.

Сообщалось, что мутация rtA181 T в HBV может вызывать sW172 * в перекрывающемся S-гене в генотипах HBV-инфекции [23]. В этом исследовании все клоны генотипа C HBV, несущие мутацию rtA181 T, имели sW172 * мутации в перекрывающемся S-геном. Штаммы, несущие мутацию rtA181 T / sW172 *, составляли 13,04% (3/23), 4,17% (1/24) и 50,0% (15/30) от общего количества клонов у пациентов 1, 3 и 4 соответственно. Это также подтверждает, что мутация HBV rtA181 T / sW172 * обычно обнаруживается в смешанной популяции с более низкой эффективностью репликации [24].

В заключение наши результаты показывают, что мутации устойчивости de novo LAM + ADV + ETV могут быть вызваны последовательной терапией ADV + LAM у пациентов, которые никогда не принимали ETV. Эти результаты дают важную информацию для администрирования последовательной терапии ADV и LAM и для использования ETV для спасательной терапии у пациентов с MDR до ADV + LAM.

10.1186 / s12941-016-0138-0 Номера доступа GenBank из 135 последовательностей из 5 пациентов с хроническим гепатитом В.

10.1186 / s12941-016-0138-0 Электроперограмма rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V + rtM250 V клон у пациента 1 (номер доступа GenBank: KU736795).

10.1186 / s12941-016-0138-0 Электроперограмма rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V + rtM250 V клон у пациента 2 (номер доступа GenBank: KU751680).

10.1186 / s12941-016-0138-0 Электроперограмма rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V + rtI169 V клон у пациента 3 (номер доступа GenBank: KU751729).

10.1186 / s12941-016-0138-0 Электроперограмма rtM204 V + rtL180 M + rtA181 V + rtM250 V клон у пациента 3 (номер доступа GenBank: KU751733).

10.1186 / s12941-016-0138-0 Перекрытие HBsAg мутаций, вызванных мутацией HBV rtA181 T.

вирус гепатита В

множественная лекарственная устойчивость

ламивудин

адефовир дипивоксил

тельбивудин

энтекавира

тенофовир дезопроксил фумарат

нуклеозид / нуклеотидный аналог

CJ внес вклад в разработку исследования, критический обзор рукописи и утверждение окончательного проекта. YS способствовал сбору данных, лабораторному тестированию и составлению рукописи. WQ, WX и LS способствовали сбору данных и лабораторному тестированию. XH внесла свой вклад в изучение дизайна и критический обзор рукописи. Все авторы прочитали и утвердили окончательную рукопись.

Исследование было поддержано Пекинской муниципальной администрацией больниц Клиническая медицина развития специальной поддержки финансирования (№ ZY201402) и капитальных исследований и развития здравоохранения специальных (№ 2011-2017-02).

Все авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.



Источник: rupubmed.com


Добавить комментарий